Izolace DNA z červené papriky: Od domácích experimentů po laboratorní analýzy

Deoxyribonukleová kyselina, označovaná DNA (z anglického deoxyribonucleic acid), je často diskutována, ale málokdo si uvědomuje, že samotná izolace je snadná i v domácích podmínkách. Nicméně získání DNA v takovém množství, že je okem viditelná a její uchování pro případné další experimenty by mohlo žáky či studenty zaujmout.

Domácí izolace DNA z červené papriky

Žáci 9.A a 9.B to zvládli i bez špičkově vybavené laboratoře. V rámci hodiny přírodopisu si vyzkoušeli izolaci DNA z červené papriky a banánu. Použili k tomu pouze několik chemických pomůcek potřebných k filtraci, sůl, jar a pochlazený líh. A jaký byl výsledek? Vysrážená DNA červené papriky a banánu pozorovatelná pouhým okem ve zkumavce s filtrátem a lihem. Žáci odvedli kvalitní práci, přestože se z důvodu neudržení lihu dostatečně vychlazeného po celou dobu práce ne všem skupinkám izolace zdařila.

Postup izolace lze různě modifikovat a používat odlišné čisticí prostředky a alkoholické nápoje, které mohou změnit celkovou výtěžnost. Lze také modifikovat postupy při izolaci DNA z masa nebo ovoce. Lze využít efektu mrazení nebo je možné ho vynechat a podobně.

Laboratorní izolace a analýza DNA z papriky

Pro další práci s DNA je již potřeba laboratorní vybavení. Cílovou skupinou by mohli být zájemci o biologii či biochemii s kreativním přístupem.

Mikroizolace rostlinné DNA z technologicky zpracovaných potravin

Diplomová práce S. GŐGHOVÉ se zabývá mikroizolací rostlinné DNA z 10 různých technologicky zpracovaných potravinových výrobků obsahujících papriku (Capsicum annum). DNA v kvalitě vhodné pro PCR byla izolována z homogenátů připravených v lyzačním roztoku s CTAB pomocí magnetických částic PGMA funkcionalizovaných karboxylovými skupinami. Kvantita a kvalita DNA byla stanovena spektrofotometricky a ověřena metodami PCR s primery specifickými pro rostlinnou rDNA. Kvalita izolované DNA se lišila v závislosti na technologickém zpracování výrobků.

Čtěte také: Vlastnosti dřevovláknité izolace – požární odolnost

Vliv zpracování na kvalitu DNA

DNA izolovaná z uzené mleté papriky a z tepelně ošetřených výrobků (s výjimkou jednoho výrobku) byla degradovaná a amplifikovala se jen s primery F_26S a R_26S (produkt PCR o velikosti 220 bp) na rozdíl od primerů F_18S a R_5.8S (produkt PCR 700 bp). DNA izolované z dalších potravinových výrobků se amplifikovaly s primery F_18S a R_5.8S (produkt PCR 700bp). PCR produkt z jedné mleté papriky (Žitavská paprika) byl klonován a sekvencován.

Identifikace druhů zeleniny pomocí DNA analýzy

Cílem práce Ing. Matúše Orela bylo vyizolovat DNA ze vzorků zeleniny (brokolice, červená řepa, mrkev a paprika). DNA se izolovala pomocí metody s magnetickými částicemi a s tradiční metodou CTAB. S obidvoma metódami se podarilo izolovat DNA ze vzorků zeleniny v kvalitě a v koncentraci vhodné pro PCR, kde se amplifikoval úsek génu 35S rDNA, přesněji úsek okolo oblasti 18S-ITS-5,8S o přibližné velikosti 700 bp.

Po amplifikaci se PCR produkty podrobily restrikčním reakcím a výsledky se porovnaly s bioinformatickou analýzou. Týmito kroky se podařilo najít vhodné enzymy pro odlišení PCR produktů z testovaných druhů zeleniny. Tato diplomová práce je zaměřena na identifikaci 4 druhů zeleniny (brokolice, červená řepa, mrkev a paprika). DNA izolovaná oběma postupy byla amplifikována s použitím polymerázové reakce (PCR). Byly použity primery 18S_for a 5,8S_rev specifické pro rostlinnou ribozomální DNA (rDNA). K analýze produktů PCR byla použita restrikční analýza, přičemž bylo testováno použití 8 různých endonukleas.

Diplomová práce přináší nové poznatky docílené srovnáním in silico analýzy s výsledky štěpení uvedenými enzymy. Autor práce zvládl celou řadu experimentálních metod, jako je izolace DNA, její fluorimetrická a spektrofotometrická kvantifikace, PCR a restrikční štěpení. Pomocí restrikční analýzy PCR produktů se podařilo odlišit od sebe všechny čtyři biologické druhy.

Přehled metod a jejich klíčových slov

V potravinářství je velmi důležité, aby se dbalo na kvalitu, bezpečnost a organoleptické vlastnosti dodávaných produktů. Z tohoto důvodu se musí potraviny kontrolovat. Avšak ne všechny informace víme zjistit pomocí konvenčních technik jako jsou například imunologické testy, chromatografické techniky a podobně. Pro tyto případy, kdy nezaberou tradiční postupy, je možné použít technik na bázi DNA.

Čtěte také: Kročejová izolace a její použití

Čtěte také: Informace o úpravě povrchu dřevovláknité izolace

tags: #izolace #dna #z #cervene #papriky

Oblíbené příspěvky:

• Druhy šelakových hmot
• Trapézové a vlnité PVC desky ONDEX
• Zjistěte tahové vlastnosti tmelů
• Zjistěte, co způsobuje praskliny v omítce a jak jim předejít
• Průvodce těsnicími lištami